春节假期将至，对于科研人来说这可是又爱又恨：一个假期回来，原本生龙活虎的细胞瞬间“暴毙”。

那么导致这种情况的原因有哪些？

节前养细胞过程该注意什么？

NEST帮你划重点！

帮细胞崽崽过龙年！

01细胞前期准备

细胞培养体系中最为重要的即为细胞培养基。常见的细胞培养方法便是90%基础培养基（DMEM、1640、F12等）+10%胎牛血清。

尽管使用广泛，但胎牛血清在细胞培养中面临着诸多问题和风险。有研究发现培养基支原体污染中的牛莱氏无胆甾原体和精氨酸支原体来源于牛血清。

因此，胎牛血清的品质至关重要。

NEST选用南美乌拉圭血源，每一批血清的生产都受到严格的控制，从血清的收集和整个处理和生产的所有阶段，按照符合欧洲法规进行处理，一直到最终包装做到全程的质量控制。

NEST胎牛血清血源地证明

NEST胎牛血清无疫病证明

NEST胎牛血清官方原产地证明

此外，NEST每一批血清都会进行完善的检测。

1. 支原体：每产品批次都要检测有无支原体。通过培养方法检测血清是否存在支原体。

2. 无菌性：产品均基于欧洲药典或美国药典进行无菌性检测，确保无细菌、酵母、大肠杆菌噬菌体等。无菌过滤、无菌分装，每生产批次中均会抽样进行无菌测试。

3. 血红蛋白：血红蛋白具有氧化性，过高会导致细胞受损。采用分光光度计测量残留血红蛋白水平。

4. 细胞培养试验：每批胎牛血清都被测试特定细胞系的体外培养效果。从细胞生长、铺板效率、克隆效率三方面评判。测试细胞种类：HeLa，L929，SP2/0-AG14，MRC-5

选用指南

02细胞冻存操作

细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。

冻存管一般用作低温储存，是常用的实验耗材，多用于生物、医药、食品等行业。采用医用聚丙烯(PP)为原料，在液氮气相的超低温环境下,可耐低温至零下196℃。

耐思冻存管分常规无码冻存管、二维码冻存管和三码合一SBS冻存管三种系列，具备完整的稳定性与安全性验证报告。

细胞在不加任何保护剂的情况下冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶从而引发一系列的不良反应。

因此，细胞冻存液至关重要。

NEST细胞冻存液改良优势

选用指南

细胞冻存操作指南（排版的时候使用上下滑动查看文字的模板）

1. 贴壁细胞制备细胞悬液：(悬浮细胞请忽略此步骤)

(1) 将旧培养基吸除,用PBS清洗两遍。

(2) 在培养瓶中加入少许胰酶,以能覆满瓶底为限。将培养瓶平置于培养箱中消化约1~2分钟,期间在显微镜下观察,一旦发现细胞间隙增大、细胞变圆、比较松动后,立即终止消化(个别难消化细胞需要延长消化时间,但要避免消化过度)。

(3) 加入适量温浴好的完全培养基终止消化,轻轻吹打均匀细胞。

2. 贴壁细胞和悬浮细胞的冻存：

(1) 取少量细胞悬液细胞计数,算出细胞总数和所需细胞冻存液的量。细胞的冻存密度以1×10^6~2×10^7 cells/ mL为宜。

(2) 将所需量的细胞悬液转移至适当离心管中,200~500×g,离心3-5分钟, 弃上清收集细胞。（离心速度和时间取决于细胞类型）

(3) 向细胞沉淀中加入适量无血清非程序细胞冻存液,用移液器轻轻吹打以重悬细胞,分装于无菌细胞冻存管中,严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。

(4) 直接置于-80℃冰箱中储存,细胞可至少保存一年;或者-80℃过夜后,次日将细胞投入液氮中长期储存。

03细胞复苏操作

1. 自液氮罐或-80℃冰箱中取出冻存管,检查盖子是否旋紧,立即放入37℃水浴中快速解冻。(避免冰晶重新结晶而造成细胞死亡),轻摇冻存管使其在1~2分钟内全部融化,以75%酒精擦拭冻存管外部,移入无菌操作台内。

2. 将解冻的细胞悬液移至15mL无菌离心管中,再加入5~10mL预热好的完全培养基,轻轻混合均匀,200~500×g,离心3-5分钟,弃上清收集细胞。(离心速度和时间取决于细胞类型)

3. 加入预热好的完全培养基,混合均匀,转移到细胞培养皿或培养瓶中,置于细胞培养箱中培养。

注：可使用耐思新推出细胞复苏仪替代原始细胞复苏过程，预热1分钟，催融阶段1分10秒左右，解冻复苏阶段大约1分20秒左右，解冻复苏后细胞存活率高。