a. 基质胶包被：

(a) 将基质胶置于冰中并在4℃融化，使用预冷的移液管或吸头混合基质胶至均匀状态。
(b) 在冰上，将基质胶用无血清培养液按照1:8的比例进行稀释，例如取8µl基质胶加入64µl不含血清的培养液中，使用预冷的吸头混合至均匀状态。

注：常用的稀释比例为1:4、1:6、1:8，可根据实验具体情况调整稀释比例。
(c) 取60µL上述混合溶液垂直加入细胞小室中，使其均匀平铺在底部。

(d) 吸出未结合的基质胶。

(e) 加入100µl不含血清的培养液，将培养板置于37℃培养箱孵育30分钟，进行水化。
(f) 去除小室中液体，检查是否有液体穿过小室进入到下室中，若没有，则可用于接种细胞。

b. 细胞悬液的制备：
(a) 对细胞进行12-24小时的饥饿处理。（非必需步骤）
(b) 消化细胞，用不含血清的培养液重悬，调整细胞密度为5-50万个/mL。

c. 细胞接种：
(a) 取500µL含10% FBS的培养液加入24孔板下室，用镊子将细胞小室置于24孔板内。

(b) 取200µL细胞悬液加入细胞小室。
(c) 将24孔板置于培养箱中培养24-48小时。

d. 细胞固定、染色：
(a) 取出细胞小室，去除培养液，用棉签轻轻擦拭基质胶及细胞。
(b) 在24孔板干净的孔中加入600µl 4%多聚甲醛固定液，将小室放入固定20-30分钟。
(c) 弃固定液，PBS洗涤小室1次。

(d) 在24孔板干净的孔中加入适量结晶紫染色液，将小室放入染色5-10分钟。
(e) 取出小室，PBS洗涤3次。

(f) 适当风干后，显微镜下观察并计数。