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2023-02-031626 次浏览
解决方案|细胞传代

细胞传代

大部分来自实体组织器官的细胞是贴壁生长的,它们在机体内,也是与其他细胞或细胞外基质结合的。

在贴壁的过程中,细胞首先分泌细胞外基质,这种细胞外基质黏附在支持物的表面(如培养瓶、培养皿的底面)。细胞通过其表面的黏附因子与这些细胞外基质结合。所以细胞贴壁与否与细胞本身分泌细胞外基质的能力以及细胞本身表达的黏附分子的数量有关,也与培养皿壁的表面结构有关。

 

















大口无碰撞

但细胞将培养瓶底部占满时,需要采用细胞消化的方法将细胞从细胞培养瓶上剥落,传代转移到其他培养器皿中继续培养,此时如何高效收获细胞,如何提高细胞回收率成为重中之重。总担心遗漏了角角落落的细胞,或是用力过猛损害细胞健康?总是担心刮刀蹭到瓶口导致污染?总是害怕移液时撞到瓶子移液不准?不用担心,耐思来助力!



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传代密度过高

一旦细胞养太久至融合度过高(>90%)才传代,容易使细胞产生老化现象,甚至是堆叠,再消化细胞时不易吹打成单颗细胞,即便再重新传代,细胞也无法回到原本的特性。(如:单层细胞,没长满就发生堆叠现象)。

解决方案

尽量避免融合度过高,镜下观察融合度约达到80%即可传代。

细胞融合度:在细胞培养中指的是细胞在培养表面(培养皿/瓶)所占的比例。

传代密度过低

贴壁培养的细胞,若细胞培养到80-90%密度需要开始传代,在传代接种细胞密度过低,细胞间距离太远,就无法在细胞间产生黏附及通信作用,帮助信号传导并活化细胞;总体细胞量不足,分泌的生长因子浓度会不足以产生利于生长的微环境,以上皆会造成增殖速度迟缓或细胞死亡。

解决方案

细胞传代时,要进行准确的细胞计数,确保接种的密度。

 

如何确定细胞的正确初始接种密度

美国细胞库(ATCC)建议各类不同细胞株接种密度:


来源:

https://www.atcc.org/support/faqs/8e032/Seeding%20Density%20for%20Cell%20Lines-25.aspx