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2023-03-211575 次浏览
解决方案|外泌体纯化&检测

外泌体是一种细胞分泌出来的小囊泡,其中包含有膜蛋白、RNA、脂质等多种生物大分子。这些物质在许多生理和病理状态中发挥着重要作用,因此外泌体的研究备受关注。为了从细胞培养物中纯化出外泌体,以下是一些基本步骤:

 

细胞培养:首先需要培养产生外泌体的细胞,比如肝细胞、肺细胞、肾细胞、干细胞等。根据不同的细胞类型,需要采用不同的培养基和培养条件。

 

细胞收集:当细胞达到一定密度后,可以将其收集下来。如果需要纯化外泌体,建议使用低血清或无血清培养基,以避免血清蛋白对外泌体的干扰。

 

离心:将细胞培养物离心,去除细胞碎片和大颗粒物质。通常建议使用低速离心(例如300×g)和高速离心(例如10,000×g)进行两次离心,以确保去除杂质。

 

超速离心:将上述离心液用超速离心(例如100,000×g)离心,收集上清液,此时上清液中应当含有外泌体。

 

洗涤:用PBS等缓冲液洗涤上清液,去除残留的蛋白和杂质。

 

再次离心:将洗涤后的上清液再次进行超速离心(例如100,000×g),去除杂质和残留缓冲液。

 

外泌体收集:将上述离心液中的沉淀物收集下来,即为外泌体。

 

上述步骤仅为外泌体纯化的基本步骤,具体操作过程仍需根据实验需求进行调整和优化。


检测外泌体,以下是几种常用的方法:

电子显微镜(EM):EM是检测外泌体最直接的方法之一。使用EM可以观察到外泌体的形态和大小,但无法获得外泌体内部的详细信息。


免疫印迹(Western blot):Western blot是检测外泌体中特定蛋白的一种方法。首先需要使用抗体识别外泌体中的蛋白,然后使用化学发光或染色方法检测抗体结合的蛋白。


流式细胞术(flow cytometry):流式细胞术可以检测外泌体的大小和数量。首先需要将外泌体标记上荧光染料,然后使用流式细胞仪检测荧光信号。


纳米粒子追踪技术(nanoparticle tracking analysis):纳米粒子追踪技术可以用于检测外泌体的大小和数量。该技术使用激光追踪纳米粒子的运动轨迹,从而推断出外泌体的大小和浓度。


上述方法各有优缺点,具体应用时需要根据实验需求选择合适的方法进行检测。