本研究通过 CRISPR 筛选发现 PKMYT1 是顺铂抗性的重要调节因子。它通过抑制DNA损伤修复路径（影响NPM1 和下游 BRCA1 等因子的功能）来帮助OS细胞逃避化疗。沉默 PKMYT1 或使用其抑制剂 RP6306 可以增强顺铂的杀伤效果，为克服骨肉瘤化疗耐药性问题提供了新方向和联合治疗思路。

顺铂（Cisplatin, DDP）是治疗骨肉瘤（OS）的主要化疗药物，但普遍存在耐药性这个问题导致其临床疗效受限。因此，更为重要的是开发增强OS细胞对DDP敏感性的方案。本研究旨在识别调控DDP敏感性的关键因子，并探讨其作为潜在治疗靶点的可能性。

研究团队采用了基因组范围的 CRISPR 筛选方法，结合转录组测序，识别出调控 DDP 敏感性的关键因子。随后，通过分析患者来源的临床样本，并进行体外功能实验，验证这些因子的作用。此外，研究还使用了选择性PKMYT1 抑制剂 RP6306，评估其与 DDP 联用的协同效应。

• 筛选结果揭示，PKMYT1 是调控OS细胞对DDP敏感性的关键因子。

• DDP 处理可诱导OS细胞中 PKMYT1 的激活。

• PKMYT1 的沉默显著增强了细胞对 DDP 的敏感性，提示其在促进化疗耐药性中的作用。

• 在机制上，PKMYT1通过磷酸化核磷蛋白1（NPM1）S260 位点，竞争性地抑制 NPM1 的 SUMO 化。这种修饰干扰了DNA损伤反应因子（如BRCA1、RAP80和RAD51）的募集，最终影响双链断裂（DSB）的修复。

• 选择性 PKMYT1 抑制剂 RP6306 与 DDP 联用，可增强其在OS细胞中的细胞毒性作用。

• 实验中用到的NEST产品：胎牛血清，涉及的细胞：143B、U2OS、HOS、U2OS/DDP、293T

• 本研究中共使用了多种人骨肉瘤（OS）细胞系及对照细胞系，包括：

  正常成骨细胞：hFOB1.19

  OS细胞系：Saos-2、MG63、U2OS、HOS、143B

  顺铂耐药细胞株：U2OS/DDP

  其他细胞系：HEK293T、ZOS/M

• 细胞培养条件如下：不同细胞系根据推荐标准，使用不同的培养基（DMEM、MEM、McCoy's 5A等）。培养基统一添加 10% NEST胎牛血清（FBS），另外还补充了1%青链霉素双抗，维持无菌状态。

• 本研究使用的 10% NEST胎牛血清（FBS） 是细胞培养系统中的核心成分之一，为细胞提供稳定的生长因子、激素及粘附蛋白。